色谱柱的清洗和再生方法知多少

色谱柱的清洗和再生的几个方法

通常情况下，

对于常用的反相色谱柱出现了严重的柱效降低需要考虑再生时，建议大家用以下流程来进行冲洗：

一、冲洗流程

1. 20倍柱体积水：乙腈= 95%：5% （用于移除系统中缓冲盐，可根据常用缓冲盐浓度调整比例）
2. 20倍柱体积 乙腈
3. 5倍柱体积 异丙醇
4. 20倍柱体积 正己烷
5. 20倍柱体积 乙腈。20倍柱体积 水：乙腈=95%：5% （可与步骤1保持相同的比例）
6. 用所需的流动相比例重新平衡色谱柱

实际上在色谱柱冲洗时，

很多实验室习惯用冲洗时间来评价是不是达到我们想要的效果。

例如某位师傅告诉你把这个柱子冲半个小时就可以了。 

然而色谱柱的冲洗应该使用冲洗的溶剂体积来评价冲洗效果。

例如这次提到的20倍柱体积的乙腈冲洗色谱柱是指什么呢？

其实柱体积需要按照你使用的色谱柱的内径和柱长来计算。

 

通过公式就很容易算出柱体积了，

例如一根4.6mm内径，150 mm柱长的色谱柱柱体积为：

如果要用20倍柱体积的乙腈冲洗色谱柱就需要约34mL的乙腈，假设你的柱流量是1mL/min，那就要用乙腈冲洗34分钟。

当柱流量是1.5 mL/min时就需要用乙腈冲洗约23分钟。

冲洗色谱柱时，色谱柱的尾端不要接检测器，接一个可以收纳废液的容器就行了。

为了应对不同类型的分析项目，实验室里常常会配置三种柱子：

一根弱极性柱，一根中等极性柱，和一根强极性柱。