HPLC和LC/MS 缓冲液选择指南：注意事项
为了持续获得高品质的结果，应例行采用一些技术。
首先，使用效果最优的试剂，大多数缓冲液成分在HPLC级可用。
相较于等度方法，梯度洗脱分离更注重缓冲液的纯度。
随着检测限度的降低，一些与试剂相关的问题变得越来越重要。
可参见图5[8]。非注射空白梯度是检查杂质的方法之一。
根据图5a可见，基线显示出多个大于10mAU的峰值。
对于0.8到1AU峰值范围的试验，这种杂质峰可以忽略不计；但对于该应用，样品应含有定量的5-10mAU的峰值。
如图5a所示，脏的空白梯度通常是因为水或试剂受到污染。
这种情况下多由缓冲液的制备方法引起。
如果通过将pH计探针浸入大量流动相来检测pH值，则图5a的结果将十分典型。
另一种方法是：去除部分流动相并检测其pH值，然后丢弃这部分溶剂，得到图5b所示的空白梯度。
由此可以看出，图5a的额外峰值主要来源于pH探针。
对于具有较大敏感度的流动相，特别是在<220nm的UV波长下，应避免pH探针接触大量的流动相。
使用缓冲液时，还应在制备完成后对缓冲液进行过滤。
尽管缓冲液是化学纯粹试剂，但在制备缓冲液的过程中，它可能会沾染灰尘，或因刮擦渗入缓冲瓶盖内衬中的颗粒物或盐沉淀。
因此，使用前应使用0.5 m孔隙度的过滤器对缓冲液进行过滤。
图5pH-探针对缓冲液的污染情况
（a）与pH探针接触后制备的缓冲液的空白梯度；
（b）不接触探针。改编自[8]。
缓冲液非常容易滋生微生物，因此应特别注意消除可能滋生微生物的条件。
重新注入前应清洗容器。
为未使用的缓冲液设置合理的有效期限，并在到期时废弃。
虽然您可能在更长时间内保持缓冲液的稳定性，但是对于稀释的缓冲液（例如<50mM），许多实验室会指定一周的使用期限，以避免微生物的滋生。
用于LC-MS的挥发性缓冲液（例如碳酸氢铵），由于挥发导致的损失，其pH值会随时间而改变。因此，这种缓冲液最好每天制备。
请勿在未洗净缓冲液的情况下，长时间关闭HPLC系统（如超过几个小时）。
如果将缓冲液留在未使用的HPLC系统中，则泵或其它组件中会产生缓冲液沉淀或滋生微生物。
如需切换至水/有机流动相（如用50/50水/MeOH代替50/50缓冲液/MeOH），首先用10-20mL冲洗系统，以去除缓冲液，然后再使用强溶剂冲洗，进而去除色谱柱中的顽固残留。
使用反相色谱柱时，用100％的水冲洗无法有效去除的缓冲液，许多固定相会用100％的水去湿（有时称为了“固定相塌陷”），从而破坏清洗过程。
然而，“高含水量”或“AQ”类型的相可以用100％的水冲洗，且不会产生去湿问题。
