HPLC和LC/MS 缓冲液选择指南：总结
· 缓冲液可用于RP-HPLC分离，以控制离子化化合物的保留。通常，我们需要抑制分析物发生电离，以最大化样品保留。这意味着，不管是
对于酸性或碱性溶剂，其流动相的pH值（理想情况下）应至少低于或高于样品pKa值2个pH单位。
· 为了实现最佳的缓冲效果，缓冲液的pKa值应在±1个pH单位内。
鉴于样品和缓冲液的这些特性，应根据表1和表2，谨慎选择缓冲液。
· 对于LC-UV分析，磷酸盐和醋酸盐缓冲液最为常用；醋酸盐 - 磷酸盐组合使用，可提供2<pH<8的范围，这涵盖了大多数RP-HPLC色谱柱的稳定性。
· 对于LC-MS应用，缓冲液必须易挥发，所以缓冲液的选择更加有限。
甲酸盐、醋酸盐、氨和碳酸氢盐（表1和2）的各种组合可广泛适用于LC-MS。
· 对于许多LC-UV和LC-MS方法，较低的pH值比缓冲效果更加重要，因此可以使用0.1％磷酸（UV）或甲酸（MS）酸来满足这一要求。
鉴于目前高纯度色谱柱的低硅烷醇活性，以及低浓度的分析物分子，最终流动相只要含有5-10mM的缓冲液，就能满足大多数应用的需求。
· 如果通过混合的方式制备流动相（A容器和B容器分别装有缓冲液和有机溶剂），应将缓冲液浓度控制在25mM以下，可避免缓冲液和有机溶剂混合时产生沉淀。
一些HPLC系统在混合过程中能比其他系统更有效的避免沉淀的产生。如果需要测量沉淀，可将缓冲液逐滴添加到有机溶剂的试管中（反之亦然）。如果观察到沉淀，则应在混合缓冲液和有机溶剂之前稀释缓冲液。
· 最后，应注意避免沾染污染物，制备后应过滤缓冲液；如果不使用系统，请勿在系统中残留缓冲液。
参考文献
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8. M.D. Nelson & J.W.Carr, LCGC 16 (1998) 992-996.
作者：
John Dolan是LCGC和LCGC欧洲的“LC故障排除”专栏撰稿人。
在250多期的专栏文章之外，Dolan博士还发表了100多篇HPLC相关的论文。
他的研究领域涵盖方法开发、色谱柱表征和梯度洗脱等方面。
他还从事与HPLC相关的仪器设计、软件编写、合同实验室管理以及教授HPLC技术等工作。
目前，John是LCResources公司的负责人。
LC Resources是一家致力于色谱技术培训和色谱问题咨询的公司。
他在本指南中与我们分享了与缓冲液使用相关的专业知识。
有关John课程的更多信息，请访问LC Resources网站：www.LCResources.com
