氨基酸的高效液相色谱方法分析
氨基酸的高效液相色谱分析方法主要分为间接分析和直接分析两种。
间接分析分为柱前衍生法和柱后衍生法；直接分析法包括高效液相色谱-蒸发光散射检测法和高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法。
现在，菲罗门公司的Comix 色谱柱可使用简单流动相在HPLC中检测非衍生氨基酸。
柱前柱后衍生法的优缺点：
柱前衍生法具有衍生试剂种类多、衍生时间短、操作简单、灵敏度高等优点，但衍生副产物以及衍生物水解会造成干扰。
柱后衍生法具有反应重复性好、衍生产物稳定等优点，但检测灵敏度较低、反应时间较长、通常需要特定的设备配件，仪器价格高等，由于衍生反应在特定反应器中进行，常造成色谱峰展宽，使分离度降低。
直接检测法及优缺点：
HPLC －ELSD 法：该方法的缺点是灵敏度较低，不能很好地解决痕量氨基酸的检测难题，且在检测时，响应值常与被测物浓度不呈线性关系或线性响应范围较窄，不利于定量分析。
HPAEC －IPAD 法：积分脉冲安培检测法无需衍生处理，只需将样品稀释至适当浓度即可直接进行分离检测。但此类氨基酸分析仪器专属性强，价格昂贵。
使用Comix 色谱柱在HPLC上检测具有操作简单、能够直接分离以及无需衍生等特点。且无需特定设备仪器，在HPLC上使用Comix 色谱柱可以直接进行分离检测。
下面我们来简单介绍一下Comix 色谱柱。
反相色谱柱是最常用色谱分析方法，但是存在极性很大的化合物很难保留、早出的峰往往变形、对极性差别很大的混合物很难使用等度分析方法等问题。
FLM公司为克服上述问题，更好的解决以及服务客户，经多年研发并推出新型Comix系列色谱产品。先进的Comix系列硅胶色谱柱包含有疏水的碳长链可以提供疏水作用，同时镶嵌阳离子，阴离子或是阴阳离子的基团，提供稳定的离子作用。也就是说这种色谱柱同时提供了疏水和离子以及极性作用。可以解决传统反相色谱柱可能难以解决的问题。
Comix系列硅胶色谱柱的特色固定相有以下七种。
Comixshell CARP 与 Comixsil RP-CX
表面阴离子嵌入键合，提供稳定的阳离子交换作用，疏水作用
Comixshell AIRP 与 Comixsil RP-AX
表面阳离子嵌入键合，提供稳定的阴离子交换作用，疏水作用
Comixsil ACRP与Comixsil RPAC
阴阳两种离子同时嵌入烷基键合硅胶，提供稳定的阴离子与阳离子交换作用，疏水作用，Hilic作用
Comixsil HCS
表面阴离子嵌入键合，提供稳定的阳离子交换作用
表面长碳链，提供稳定的疏水作用
表面特殊的氢键授于与接受
同时提供的离子排阻作用
适用于所有有机溶剂与纯水相
两个应用案例（更多请详询菲罗门公司销售）：
Comixshell CARP 色谱柱对12种非衍生氨基酸的HPLC分离（没有离子对试剂）
色谱柱: Comixshell CARP
色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm (FMF-CARP-EONU)
流动相:
|
时间（min） |
乙腈（mL） |
水（mL） |
硫酸（mL） |
|
0 |
20 |
979.8 |
0.2 |
|
15 |
500 |
498 |
2 |
流速: 1 mL/min
检测: UV 220 nm
Comixsil HCS柱分析18种非衍生氨基酸（可匹配MS)
色谱柱：Comixsil HCS 3μm 100×3.0mm
（货号：FMD-HCS3-YONU）
流动相：乙腈：100mM 甲酸铵（pH 3）=80:20
流速：0.6mL/min
进样体积：3μL
样品浓度：0.6mg/mL
检测器：ELSD 45oC
1.Tryptophan （色氨酸）
2.Phenylalanine （苯丙氨酸）
3.Leucine （亮氨酸）
4.Methionine （蛋氨酸）
5.Tyrosine （酪氨酸）
6.Isoleucine （异亮氨酸）
7.DOPA （二羟基苯丙氨酸）
8.Valine （缬氨酸）
9.Cysteine （半胱氨酸）
10.Proline （脯氨酸）
11.Alanine （丙氨酸）
12.Threonine （苏氨酸）
13.Glutamic acid （谷氨酸）
14.Glycine （甘氨酸）
15.Glutamine （谷氨酰胺）
16.Asparagine （天冬酰胺）
17.Serine （丝氨酸）
18.Aspartic acid （天冬氨酸）
最后，对于研究手性氨基酸的工作者，我公司的18种液相手性柱，拥有几乎对所有的FMOC, BOC保护型氨基酸的手性拆分应用。欢迎有需要的分析工作者咨询。
附录：
资料来源：
［1］赫欣睿. 高效液相色谱法测定氨基酸的研究进展［J］，分析测试学报，2016(7)：922-928.
［2］唐涛. 氨基酸柱前衍生化HPLC方法发展及应用［J］，南京理工大学，2006.
