Hiilic的“爱“与“恨”
Hilic模式色谱柱对于很多色谱分析工作者来说，总有说清的“爱“与“恨”。
爱的是他能解决一些常规C18搞不定的大极性化合物分析，无可替代；恨的是有时候用起来总是觉得不顺心，一言不合就出现各种问题，峰型差、峰漂移、不出峰等等。
那碰到这样的情况是不是色谱柱坏了，还是样品出了什么问题？
其实不然，更多的时候是我们不了解其特性，没把握住，没有用好。
今天小编总结了几道小伙伴们碰到的比较多的问题，一起来了解下Hilic色谱柱的特性，今后碰到问题不用怕，让“恨”少一点。
Q1:Hilic是什么，什么时候用？
A:HILIC也叫亲水作用色谱，是区别于反相液相色谱（RPLC）另一种作用模式，主要用于大极性化合物的保留和分离。
HILIC为亲水大极性分析（LogP为负值）物提供了 RPLC的替代选择，无需使用离子对试剂即可实现保留分离。
Q2:Hilic与RPLC反相C18有什么不同？
A:主要是作用机理不同，反相C18是根据分析物疏水性强弱不同保留和分离化合物，而HILIC保留机制包括各种极性相互作用和静电相互作用 （即离子交换式）。
用HILIC对极性分析物进行分析时，保留机制可能是其中的任意一种，也可能是所有机制同时作用。
比较直观的表现两者的不同，疏水化合物在反相C18上的保留顺序与Hilic模式下刚好相反。
Q3:Hilic柱为什么重现性差，容易出现峰漂移、峰型差、不出峰的情况？
A:Hilic柱在连续进样后出现峰漂移、峰型差、不出峰的情况，多半是因为色谱柱活化平衡不好的原因。
由于Hilic色谱柱与分析化合物主要的作用都在固定相粒子表面的水合层，尤其是在大梯度的洗脱变化，更容易造成水合层的失衡，色谱柱原有的作用力产生变化，就会出现上述的种种现象。
Q4:Hilic柱怎么活化平衡？
A:通常在反相C18柱，柱平衡约为10倍柱体积即可，但是对于HILIC分离则不同，新启用Hilic色谱柱需要60-80倍柱体积流动相平衡，第二次以及之后的每次运行，建议采用20倍柱体积流动相平衡。
实际中活化平衡的时间也会因项目的不同可能需要更长的时间，小编曾经还碰到新柱子冲过夜才能正常出峰的例子。
ACE 100 Å多孔柱达到20和60倍柱体积平衡所需的时间表
Q5:不同厂家的Hilic柱差异是不是比较大，为什么在做方法耐用性的时候发现很多同型号的Hilic柱无法重现？
A:不同厂家的Hilic柱差异还是比较大的，主要是填料的固定相差异，有采用非键合硅胶填料的，也有的是各种键合相硅胶填料的（这其中还包括酸性的、碱性的、中性的和新型的化学相）。
不同的固定相填料，色谱柱的选择性会有很大的差异，保留不一样，方法就难以重现。
PS:
*酸性ACE HILIC-A相，能形成负电荷，对带正电的碱基（碱性物质）产生静电吸引，而带负电的酸性物质则被排斥。
*中性ACE HILIC-N相对阴阳离子都显示出较低的离子交换能力,保留机制包括极性相互作用、吸附和一定的分散作用。
*碱性ACE HILIC-B相，能形成正电荷，对带负电的酸性物质产生静电吸引，而带正电的碱基（碱性物质则）则被排斥。
Q6:用Hilic做方法开法怎么进行，有没有比较简单流程步骤？
A:结合大极性分析物和Hliic色谱柱的特点，我们建立了一套可行的方法开发流程，可供大家参考。
需要更详细的技术资料，或项目技术支持可以联系我们。
Q7:Hilic色谱柱类型那么多，该怎么选择合适？
A:要选择合适的色谱柱，主要从所要分析的化合物去选择。酸性极性化合物就选择碱性硅胶固定相的Hilic色谱柱；反之，碱性极性化合物就选择酸性硅胶固定相的；中性极性化合物
可选择中性或者酸性、碱性都可以。ACE提供市面常见的酸性（Hilic-A）、碱性（Hilic-B）、中性（Hilic-A）三种固定相Hilic色谱柱方法开发包，可作为分析工作者的首选工具。
结语：小编今天给大家总结分享了一些工作中小伙伴们经常问到的关于Hilic色谱柱的一些使用问题，希望能对我们分析工作者有所裨益，然小编才疏学浅，有相左之处欢迎大家不吝赐教。
