色谱分析中的选择性的控制混合作用色谱柱介绍和方法开发精要
·什么是混合作用色谱?
What is Mixed-mode Chromatography?
West and co-workers defined the term as the combined use of two (or more) retention mechanisms in a single chromatographic system.
-C. West, et al., LCGC North Am. 30(6s), 22–33 (2017).
Gilar and co-workers further define the term as the use of multiple dominant retention mechanisms.
-Z. Kadlecová, et al., J. Chromatogr. A 1625, 461301 (2020).
·什么时候需要用到混合作用色谱?
1. 当我们需要定量分析无机离子,但是没有配备离子色谱仪时;
2. 当分析大极性有机小分子,但不能或者不想使用离子对试剂时;
3. 当需要同时保留和分离性质差异大的多个化合物(如强疏水,强亲水等)时;
4. 当遇到一些带强电荷基团(如季铵基)的化合物,用C18类色谱柱时峰形难以改善时;
色谱柱选择的基本原则:
选择的色谱柱可以和分析物有一种强的作用力,另一种弱的或者中等的作用力;
避免固定相与分析物存在两种强的作用力,以免保留过强,需要过高浓度的缓冲盐的流动相,同时很可能会导致峰形问题;
·Comix系列色谱柱方法开发的色谱柱选择和流动相设计
·案例分析
反相作用:有机相越低作用越强;
HILIC作用:当有机相>70%时才比较明显,有机相越高HILIC保留越强;
离子交换作用:当分析物上的基团与固定相上的基团所带电荷相反时,就存在离子交换作用;可以通过调节pH值改变固定相和分析物上弱酸基团的电离程度,从而改变离子交换强度;同时可以通过改变缓冲剂的浓度和有机相浓度来调节离子强度,离子强度大洗脱更强;
离子排斥作用:当分析物上的基团与固定相上的基团所带电荷相同时,就存在离子排斥作用;可以通过调节pH值改变固定相和分析物上弱酸基团的电离程度,从而调节离子排斥作用;同时可以通过改变缓冲剂的浓度和有机相浓度来调节离子强度,离子强度大,排斥越小。