高效液相柱的四个使用注意事项
高效色谱柱是一种具有极高碳载量的固定相。高碳链覆盖度使其具有密集的键和优异的形状选择性,在PH低至1的环境中仍能保持良好的稳定性。它主要应用于传统的C18柱无法分离的类胡萝卜素的异构体和其他长烃基物质的分离。
高效液相柱的使用的四个注意事项:
在使用前,进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照出厂报告中的条件进行,只有这样,测得的结果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
1、在条件允许情况下,在使用前对新色谱柱按照说明书方法进行柱效测试。以确保色谱柱的正常。
2、所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于60℃。
3、样品
将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱,则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。样品溶液不应含有任何颗粒物,使用0.5μm或更小粒径的滤膜过滤。样品溶液如果使用强溶剂(例如,流动相为水,样品溶剂为甲醇),为达到较好峰形,需要降低进样量(以250x4.6mm规格为例,小于10μL)。
4、流动相
所有流动相,特别是含有缓冲盐的流动相,当日实验当日配制;如果使用了前日配制的流动相,请确保流动相pH值没有变化,并确保流动相没有长菌。流动相的pH值取决于您的应用和色谱柱填料类型。