HPLC色谱应用的经典案例分析
HCS和ACRP的经典案例分析
应用原理：利用阴阳离子交换或者排斥做保留，然后通过分析物的亲水差异把它们洗脱下来。
使用HCS分离多种糖
由上图可以看出，其四个的羟基pka最小都在11左右，所以在酸性的条件下并不存在电离的情况，不能使用阴阳离子交换或者排斥作用。
只能通过亲水性和氢键作用把他们分开，由于果糖和葡萄糖都是5个羟基，只是位置不同，所以在图谱里可以看到，两个峰是距离很近的。
由上面几个图可以看到，四个氨基酸他们都有一个氨基的pka在9左右，也就是说ph低于7都有电离，而且他们也都有一个羟基的pka在2左右，所以ph大于4左右也会有电离，所以当使用的缓冲盐的ph等于5时，可以使用阳离子交换和阴离子排斥的作用，同时也可以使用氢键的作用作为保留。再根据他们的亲水性不同，将他们分开。
四丁基铵离子比溴离子和氯离子先出峰峰可能的原因是分析物的疏水性太强，缓冲盐ph=3，导致固定相上的电离不够，从而阳离子交换作用也不强，导致在Hilic模式里没什么保留。
当缓冲盐的PH用到了5，观察第一个图谱和条件，四丁基铵离子因为只有一个位点的阴阳离子交换，该流动相条件下几乎没有没有Hilic作用，导致出峰最慢。此PH状态下，甜菜碱具有两个位点的电离，阴阳离子交换比较强，所以最先出峰。观察第二个图谱和条件，此时的流动相条件下具有Hilic作用，又因为四丁基铵离子是分析物中疏水性最强的，所以最先出峰。
该流动相条件下只使用了阴阳离子的交换作用，分离分析物，缓冲盐的PH设置到5，可能是为了让固定相有足够的电离，更好将钠离子和钾离子分离开来。
