高效液相梯度洗脱时注意事项如下：
1. 注意溶剂的互溶性。不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定的比例内互溶，超出一定的范围后就不会互溶。例如：乙腈和1mol/L的醋酸铵（pH5.5）混合时会产生沉淀。
2. 梯度洗脱对溶剂纯度的要求更高以保证其良好的重现性。进行试样样品分析前，为辨认溶剂杂质峰必须进行梯度洗脱，因为富集在色谱柱头上的弱溶剂的质杂会被强溶剂洗脱下来。应用梯度洗脱的溶剂需要彻底脱气防止其混合时会产生气泡。
以上就是高效液相梯度洗脱时注意事项，您可以根据实际情况选择适合您的方案。
