液相色谱柱污染后,需要进行清洗和再生。以下是清洗和再生的方法:
1. 反相色谱柱的清洗:
(1)分别用甲醇、三氯甲烷、甲醇-水各20倍柱体积,使之通过柱子。然后用流动相平衡(通常仍用20倍柱体积),柱一般将恢复正常。
(2)如果选择性仍和以前不一样,则表明还有其他杂质留在柱子里,这时应考虑更加严格的清洗:先用20倍柱体积的水,再用相同体积0.05mol/L硫酸,最后用流动相溶剂。酸洗常能洗下有机溶剂所不能洗下的剩余杂质。
(3)对于严重污染的反相柱,只能采用再生的方法。
2. 正相色谱柱的清洗:
(1)用正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇等溶剂做流动相,顺次冲洗,每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积(异丙醇粘度大,可降低流速,避免压力过高)。注意使用溶剂的次序不要颠倒,用甲醇冲洗完后,再以相反的次序冲洗至正己烷,所有的流动相必须严格脱水。
3. 离子交换色谱柱的清洗:长时间在缓冲溶液中使用和进样,将导致色谱柱离子交换能力下降,用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生,反之,用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生。
需要注意的是,如果色谱柱污染严重或不确定污染程度,建议咨询菲罗门相关技术人员或专业机构以进行更详细的清洗和再生。