色谱分析中的梯度洗脱是一种常用的洗脱方式，它可以改善大分子化合物方法的重现性，并且分离的过程通常比较快，效率高而且简便。
梯度洗脱主要分为线性梯度、曲线梯度和分段梯度，其中线性和分段梯度应用最广。
以下是使用梯度洗脱的常见原因：
1. 样品极性范围较大，具有较宽的K值范围。这超出了等度洗脱的优先目标范围（1≤k≤20），若采用等度洗脱可能会导致样品运行时间过长，分离度不够或目标化合物残留未洗脱下来等问题。若采用梯度洗脱，则可以大大缩短方法的运行时间，提高分离效果，避免残留问题的发生等。
2. 样品中含有晚出峰的干扰物，会污染色谱柱或者是在后续运行中才洗脱出来；此外，样品中若含有极性大的化合物，在等度洗脱的时候也可能会干扰样品中前端出峰的目标化合物的分离。采用梯度洗脱往往就能够得到更好的分离，而可以省去样品处理的过程。
对于一个未知样品，通常反相色谱条件最初的流动相梯度会参照如下方法进行设置。如果在上述条件下，30分钟之后还有化合物被洗脱下来，则需要考虑更换保留能力更弱的固定相，或更换洗脱能力更强的有机溶剂，重新进行实验。
