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菲罗门Chiral多糖型手性柱的使用及维护
一、手性固定相一览表
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正相涂敷型固定相
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Chiral ND,ND(2), NC(2),NJ(2),NQ(2),NS(2),NT(2),NX(2), NY(2),NZ(2), MB(2), MC(2), MF(2), MG(2), MD,MD(2),MJ(2),MQ(2),MS(2),MX(2),MY(2), MZ(2)
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正相键合型固定相
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Chiral INA, INB, INC,INE,INF,ING,INH, INJ,INK,INM
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反相涂敷型固定相
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Chiral ND(2)-RH, NC(2)-RH,NJ(2)-RH, NQ(2)-RH, NS(2)-RH,NX(2)-RH, NY(2)-RH,NZ(2)-RH, MD(2)-RH, MJ(2)-RH, MQ(2)-RH,MX(2)-RH, MZ(2)-RH, MS(2)-RH, MY(2)-RH
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二、常用优化峰形的添加剂的选择（正相，反相，SFC都可使用）
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酸性样品
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碱性样品
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常规一般使用
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三氟乙酸，甲酸
(0.1%-0.5%)
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二乙胺
(0.1%-0.5%)
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考虑继续调整峰形使用
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甲磺酸
(0.1%)
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三乙胺、乙醇胺、正丁胺(0.1%-0.5%)
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特别需要时，酸性与碱性添加剂可以同时添加，建议各0.1%
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添加剂适合正相以及SFC超临界流体，以及反相（反相应用时，建议0.05%-0.1%）
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三、正相涂敷型手性固定相常用起始条件
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１
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2
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起始条件
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HEX:IPA=80:20
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HEX:EtOH=80:20
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调整范围
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HEX 99%至50%之间
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HEX 99%至50%之间
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HEX:正己烷，IPA:异丙醇，EtOH:无水乙醇
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HEX比例增加，保留时间会变长
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IPA与EtOH一般比例不超过50%，遇到极性特别大的样品，允许最高至95%，正常情况控制在50%以下
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起始柱温为25℃，起始流速建议在0.8ml/min左右。有条件的情况下，温度在5-25℃内调整，对分离度可能产生大的影响。温度低有时利于拆分，温度高，出峰快，峰形可能更尖锐
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Chiral MF(2), Chiral MG(2)流动相中不能用乙醇
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正相涂敷型手性固定相不能接触下列溶剂：甲基叔丁基醚(MtBE)，二氯甲烷(DCM)，四氢呋喃(THF)，乙酸乙酯(EtOAc)，氯仿(CHCl3)，丙酮等
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四、正相键合型手性固定相常用起始条件
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１
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２
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起始条件
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HEX:IPA=80:20
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HEX:EtOH=80:20
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调整范围
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HEX 99%至50%之间
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HEX 99%至50%之间
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3
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4
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起始条件
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MtBE:EtOH=98:2
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HEX:DCM=50:50
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调整范围
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MtBE 98%至60%之间
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HEX 85%至50%之间
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5
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6
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起始条件
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HEX:THF=70:30
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HEX:EtOAc=50:50
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调整范围
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HEX 99%至70%之间
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HEX 99%至50%之间
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7
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8
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起始条件
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HEX:CHCl3=30:70
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ACN:IPA(或MeOH)＝100:0
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调整范围
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HEX 60%至100%之间
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ACN 100%至90%之间
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HEX比例增加，保留时间会变长
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除了上述溶剂，溶解与洗脱的必要性下，丙酮以及1,4二氧六环也可使用
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起始柱温为25℃，起始流速建议在0.8ml/min左右。有条件的情况下，温度在5-25℃内调整，对分离度可能产生大的影响。温度低有时利于拆分，温度高，出峰快，峰形可能更尖锐
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五、反相手性固定相常用起始条件
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酸性及两性化合物
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碱性化合物
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中性化合物
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水相 40%
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0.1%甲酸水
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0.1% TFA
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水
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0.1% TFA水
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PH=2 100mM高氯酸钠水溶淮
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PH=2.5 50mM磷酸缓冲盐
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PH=2.5 100mM六氟磷酸钾水溶液
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0.1%磷酸水
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20mM碳酸氢铵水溶液（PH=9）
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PH=2 100mM高氯酸钠水溶液
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20mM碳酸氢铵水溶液（PH=9），含0.1% DEA
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PH=2 100mM六氟磷酸钾水溶液
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有机相 60%
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ACN, MeOH, IPA
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六、正相涂敷型与键合型手性柱的清洗与保存
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常规清洗
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HEX:IPA=80:20 0.4ml/min 1-2小时并直接保存
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柱效下降，峰形不正常时可能的特殊残留物清洗，再生
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酸性残留
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碱性残留物
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性质不确定的残留物
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EtOH(0.1% DEA) 0.2ml/min 2小时
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EtOH(0.1% TFA) 0.2ml/min 2小时
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第1步EtOH(0.1% TFA) 0.2ml/min 2小时
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第2步EtOH(0.1% DEA) 0.2ml/min 2小时
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清洗完毕后，再用HEX:IPA=80:20 0.4ml/min 1小时，并按COA测试后直接保存
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EtOH不适用于Chiral MF(2)与Chiral MG(2)固定相。Chiral INB, INC可用EtOAc再生
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说明：如果是柱头堵塞与污染，可以0.2ml/min流速倒冲
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七、反相涂敷型与键合型手性柱的清洗与保存
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常规清洗
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ACN:H2O=10:90 0.5ml/min 1小时，ACN:H2O=90:10 0.5ml/min 1小时,保存于ACN:H2O=75:25（或60:40）体系中
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柱效，柱压，峰形问题时，特殊残留物的清洗，再生
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第１步：MeOH:H2O=10:90(含0.1% TFA ) 0.2ml/min 1小时
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第２步：MeOH:H2O=90:10(含0.1% TFA ) 0.2ml/min 1小时
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第３步：MeOH:H2O=99:1(含0.1% TFA ) 0.2ml/min 2小时
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第4步：ACN:H2O=75:25 0.5ml/min 30分钟，并按COA测试后直接保存
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说明：如果是柱头堵塞与污染，可以0.2ml/min流速倒冲
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八、手性色谱柱启用与切换的注意
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所有正，反相手性柱启用时，建议流动相下0.2ml/min流速先运行10分钟，再提升到0.5ml/min流速运行5分钟，再提升到需要运行的流速
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正相涂敷型与键合型手性柱，都可以在正相体系，SFC体系(甲醇与液态二氧化碳体系)以及PO极性体系（纯ACN或纯MeOH为流动相，或者含5%的IPA）切换使用。从一种体系切换到另一种体系时，需用20倍柱体积的IPA以0.2ml/min冲洗以切换。按250*4.6mm柱计算，20倍柱体积约50ml
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键合型手性柱，出厂在正相体系中，如果要转化为反相柱使用，需用20倍柱体积的IPA以0.2ml/min冲洗后，再用反相体系冲洗转化为反相柱，之后按反相柱的操作进行。一旦转化为反相手性柱，则不能再切换回正相
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九、手性柱主要特点
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适用PH范围为2-９
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适用温度范围为0-40℃
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适用压力上限为300bar
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可供应色谱柱，制备柱产品的粒径为 3u, 5u, 10u，内径为2.1mm, 3.0mm, 4.6mm,10mm, 21.2mm, 30mm, 50mm，长度为50mm, 100mm, 150mm, 250mm
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可供应的填料粒径为10u
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十、一些溶剂的UV截止波长
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溶剂
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UV截止波长
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溶剂
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UV截止波长
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HEX
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200nm
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IPA
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205nm
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EtOH
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210nm
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MeOH
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205nm
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ACN
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190nm
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H2O
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小于190nm
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DCM
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233nm
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EtOAc
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256nm
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MtBE
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210nm
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THF
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212nm
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