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App ID: FLM-T240007 Titank C18 PITC 柱前衍生法检测中 17 种氨基酸 色谱柱： Titank C18 柱 250 mm× 4.6 mm，5μm ; （货号：FMG-5560- E0NU） 柱温: 35 ℃ 检测波长: 254 nm; 流速: 1.0 mL /min 进样量: 5μL 流动相: A:乙腈 B:0.1mol/L 醋酸钠溶液
 说明：使用 Titank C18 色谱柱，成功采用 PITC 柱前衍生法分析 17 种氨基酸，相邻色谱峰分离度均大于 1. 5。 建议可用 Titank C18 3u 250*4.6mm(货号：FMG-5559-EONU)获得更大的分离度。
注释：本应用摘自 Journal of Chinese Medicinal Materials DOI:10.13863/j. issn1001-4454.2019.06.025 《 PITC 柱前衍生 HPLC 测定乌梅 17 种氨基酸的含量》
柱前衍生法是一种常用的氨基酸检测方法，它通过衍生化反应将氨基酸转化为更易检测的化合物，从而提高检测的灵敏度和准确性。在柱前衍生法检测中，通常会涉及到多种氨基酸的测定，包括但不限于以下17种常见氨基酸：
### 1. 氨基酸种类
* **Asp（天冬氨酸）** * **Thr（苏氨酸）** * **Ser（丝氨酸）** * **Glu（谷氨酸）** * **Pro（脯氨酸）** * **Gly（甘氨酸）** * **Ala（丙氨酸）** * **Cys（胱氨酸）**（注意：有时也指半胱氨酸，具体取决于实验条件和需求） * **Val（缬氨酸）** * **Met（蛋氨酸）**（也称甲硫氨酸） * **Ile（异亮氨酸）** * **Leu（亮氨酸）** * **Tyr（酪氨酸）** * **Phe（苯丙氨酸）** * **Lys（赖氨酸）** * **His（组氨酸）** * **Arg（精氨酸）** * **Trp（色氨酸）**（注意：色氨酸在酸水解过程中可能会被破坏，因此在某些检测方法中可能不包括在内）
### 2. 柱前衍生法检测步骤
柱前衍生法检测氨基酸的一般步骤包括样品前处理、衍生化反应、高效液相色谱（HPLC）分析等。以下是一个简化的流程：
#### 样品前处理
* 将样品中的蛋白质通过酸水解（如盐酸水解）转化为游离氨基酸。 * 过滤或离心去除杂质，得到纯净的游离氨基酸溶液。
#### 衍生化反应
* 将游离氨基酸与衍生试剂（如异硫氰酸苯酯、邻苯二甲醛等）反应，生成具有紫外吸收或荧光特性的衍生物。 * 衍生化反应通常在室温下进行，并需要一定的反应时间（如1小时）。
#### 高效液相色谱分析
* 将衍生后的样品注入HPLC系统进行分析。 * 根据不同氨基酸衍生物在色谱柱上的保留时间和紫外吸收强度进行定性和定量测定。
### 3. 柱前衍生法的优点
* **高灵敏度**：通过衍生化反应提高了氨基酸的检测灵敏度。 * **高分辨率**：HPLC技术能够实现多种氨基酸的有效分离。 * **准确性高**：外标法定量准确可靠。
### 4. 注意事项
* 在进行柱前衍生法检测时，需要注意控制实验条件（如温度、pH值、反应时间等），以确保衍生化反应的完全性和一致性。 * 色氨酸在酸水解过程中可能会被破坏，因此在使用酸水解法时需要特别注意其稳定性。 * 衍生试剂的选择和用量也会影响检测结果的准确性和灵敏度，需要根据实验条件进行优化。
综上所述，柱前衍生法是一种有效且常用的氨基酸检测方法，能够准确测定包括17种常见氨基酸在内的多种氨基酸。在实际应用中，需要根据实验条件和需求选择合适的衍生试剂和HPLC条件，以确保检测结果的准确性和可靠性。
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