HPLC基线漂移是指在高效液相色谱(HPLC)分析中,基线随时间发生不稳定变化的现象。这种现象可能掩盖真实的样品信号,导致分析结果不准确。以下是导致HPLC基线漂移的几个主要因素:
1. **柱温和流动相温度波动**:
* 对于部分检测器,尤其是示差折光检测器或高灵敏度的紫外检测器,柱温和流动相的温度波动可能导致基线有规律的上升和下降。
* 解决方法:控制好柱子和流动相的温度,可以在进入检测器前使用热交换器或在检测器之前进行温度调节。
2. **流动相不均匀、污染、变质或由低品质溶剂配成**:
* 流动相的不均匀性、污染、变质或使用低品质溶剂可能导致基线漂移。
* 解决方法:使用HPLC级的溶剂和高纯度的盐和添加剂,对流动相进行脱气处理。定期检查流动相的组成,确保其品质。
3. **流通池污染或有气体**:
* 检测器流通池的污染或存在气体可能导致基线漂移。
* 解决方法:采用极性强的溶剂(如甲醇)对检测池进行冲洗。如有必要,可以使用1N浓度的稀硝酸进行冲洗(注意避免使用盐酸,且不要接PEEK接头)。
4. **色谱柱平衡不充分**:
* 色谱柱平衡不充分,尤其是更换流动相时,可能导致基线漂移。
* 解决方法:采用中极性强度的溶液,在分析前对色谱柱进行冲洗,冲洗的体积通常需要达到10\~20倍的色谱柱体积。
5. **样品中的强保留物质**:
* 样品中存在强保留的物质(高K’值)可能以馒头峰样被洗脱出,表现为基线的抬升。
* 解决方法:使用保护柱,并在必要时定期用强溶剂冲洗柱子。
6. **检测器设置问题**:
* 检测器设置不当,如波长未调整至最大吸收波长处,也可能导致基线漂移。
* 解决方法:根据实验需求调整检测器的设置,确保波长等参数正确。
7. **设备老化和操作技术水平**:
* 设备长时间使用后可能出现老化现象,如柱子老化、传感器性能下降等,这些都可能导致基线漂移。
* 操作技术水平不够熟练或设备调整不当也可能导致基线漂移。
* 解决方法:定期检查和维护设备,确保设备处于良好状态。同时,提高操作技术水平,确保正确调整和使用设备。
综上所述,导致HPLC基线漂移的因素多种多样,需要综合考虑并采取相应的解决措施。在实验中,应密切关注基线变化,及时发现问题并采取措施进行纠正,以确保分析结果的准确性和可靠性。