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EDTA(乙二胺四乙酸)与DTPA(二乙烯三胺五乙酸)HPLC直接分离分享
EDTA DTPA
根据样品分子结构式可知,EDTA包含两个氨基(-NH)和四个羧基(-COOH),而DTPA比EDTA多了一个氨基(-NH)和一个羧基(-COOH)。EDTA和DTPA具有多个羧酸基团使其具有强酸性,而氨基则赋予其弱碱性,由于羧酸基团比氨基数量多,因此EDTA和DTPA在溶液中主要表现为酸性。
EDTA和DTPA是市面上常见的螯合剂,部分溶于水,需要借助其螯合作用加入“NaOH”助溶,使其钠盐的形式存在。
考虑以上两个化合物,同时存在酸、碱基团,且极性较大。我们考虑采用同时具有“阴阳离子交换(阳阴离子排斥)+Hilic”作用能力的Comixsil ACRP色谱柱(嵌入了阴离子与阳离子的亲水短链烷基键合硅胶柱)进行分析。
色谱柱
Comixsil ACRP 5μ 250*4.6mm(货号:FMG-ACRP-EONU)
检测器条件
ELSD,40℃;2.5L/min
流速
1.0ml/min
柱温
25℃
进样体积
10μl
样品配置
1. 称取EDTA 3.2mg 加入1ml(70℃)超纯水溶解,再加入50μl 1MNaOH混匀过0.22μm滤膜。
2. 称取DTPA 2.2mg 加入1ml(70℃)超纯水溶解,再加入50μl 1MNaOH混匀,再超声5min过0.22μm滤膜。
3. 混标用移液枪吸取EDTA与DTPA过滤液各200μl等比例混匀,即可。
流动相
T(min)
100mM 甲酸铵溶液(pH 4)
乙腈
25
75
色谱图:
Comixsil ACRP 5μ 250*4.6mm
空白对照色谱图(0.05M NaOH)
EDTA样品色谱图
DTPA样品色谱图
混标色谱图
空白对照与EDTA、DTPA和混标对比图
结果分析:
使用Comixsil ACRP 5μ 250*4.6mm色谱柱进行实验,由色谱图可见,分离度分别为7.9与7.8,分离情况良好,且理论塔板数>5000(在10000左右),要缩短时间,也可尝试本款柱子的其他规格(如Comixsil ACRP 3μ 150*4.6mm, 货号:FMF-ACRP3-EONU)进行改善。同时该方法也可用于CAD, MS检测器。
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