测定多肽一般采用什么色谱柱？

1. 常用柱型

反相C18柱（最常用）

主要机理：以疏水作用为主，多肽氨基酸残基（尤其是疏水性残基）与C18固定相亲和，极性较强的多肽流出较快，疏水性强的多肽保留时间长。

流动相：通常采用水+有机溶剂（乙腈ACN或者甲醇MeOH），加适量酸（如0.1%三氟乙酸TFA、0.1%甲酸）有助于提高峰形和抑制二级结构形成。

粒径：分析级常选1.7–5μm，UPLC用更小粒径，制备级可用更大粒径。

反相C8柱

链长略短（八烷基），疏水性比C18弱，部分小肽或极性更高的肽类用C8分离更适合。

亲水相互作用色谱（HILIC）柱

偶用于高极性、小分子多肽、亲水肽段，分离补充反相法。

2. 选择理由

多肽分子疏水和亲水残基兼具，一般反相柱对不同疏水性多肽保留分辨能力强，适用面宽；

多肽在正相色谱（如硅胶）及离子交换色谱上，分离选择性不如反相柱直接、通用，且正相色谱对生物样品适应性差；

可与紫外检测（214 nm、220 nm等）和质谱（MS）兼容——反相流动相无需高浓度盐，且挥发性好，利于MS联用。

3. 实验注意要点

柱温一般调至30°C–60°C以减少多肽二级结构影响；

多肽样品勿溶于高浓度盐或杂质含量高的缓冲液，否则易污染色谱柱；

若为极高分辨率（如肽指纹图谱、肽同分异构体分离），可选小粒径（如1.7 μm UPLC柱）或长柱。

4. 补充：制备分离时

依然以大内径C18反相柱为主，但流速和柱尺寸增大。

对于特殊大/小肽或结构特殊肽段，也可能选用离子交换色谱、凝胶色谱等其他类型分离手段。