牛奶中苯甲酸检测的固相萃取方法

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC 法作为分析方法，检测食品中苯甲酸含量。
该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

苯甲酸 (CAS:65-85-0)

三、应用范围

本方法适用于食品中苯甲酸的检测的 HPLC 检测及确证。

四、参考标准

《GB/T 23495-2009 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法》
五、实验材料

NuAnalytical PolyClean X-MAX 固相萃取柱 60mg/3mL。
六、实验方法

1、 样品待测溶液制备

准确称取牛奶 10 g 于 50 mL 离心管中，加入 0.25 mol/L 的亚铁氰化钾溶液 2 mL，摇匀，再加入 1  mol/L 的乙酸锌溶液 2  mL，摇匀，4000  r/min 离心 10  min。上清液待净化。

2、活化

依次用 3 mL 甲醇、3 mL 水活化

3、上样和洗脱

在MAX 固相萃取柱上加入 5 mL 备用样液，弃去流出液。
用3 mL 2%氨水水溶液（v/v）、 3mL 甲醇淋洗，弃去淋洗液；抽干小柱；用 2 mL 5%甲酸甲醇溶液（v/v）洗脱，收集洗脱液（整个上样、洗脱过程保持流速 1 mL/min）。

4、重新溶解

收集洗脱液，洗脱液过 0.45 μm 滤膜，供高效液相色谱测定。

5、HPLC 条件

色谱柱：SuperLu C18 (250×4.6mm,   5μm)

检测器：Waters 2487 紫外双波长检测器；检测波长：230nm

流动相：A 乙腈    B-磷酸盐缓冲溶液（称取磷酸二氢钾 2.5g+磷酸氢二钾 2.5g，加水 溶解定容到 1000mL）

洗脱方式：等度洗脱，A:B=10 : 90

流速：1.0 mL/min

柱温：30  ℃

进样量：20 μL

七、实验结果

1、25 mg/kg 牛奶中苯甲酸的添加回收结果

表 1   牛奶中苯甲酸 25 mg/kg 添加回收结果