火腿中胭脂红和诱惑红检测的固相萃取方法             
  (菲罗门专用的食品中色素提取分析 Polyclean X-PAmide 小柱)

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC 法作为分析方法，检测火腿中胭脂红和诱惑红的含量。
该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

胭脂红(CAS:569-64-2)，诱惑红(CAS: 25956-17-6)。

三、应用范围

本方法适用于火腿或者猪肉中多种合成着色剂的检测的 HPLC 检测及确证。

四、实验材料

NuAnalytical Polyclean X-PAmide 小柱 500mg/6mL(9B-P006-06500)。

五、实验方法
1、样品提取

准确称取粉碎好的火腿 10.0 g 于 50 mL 离心管中，加入 30 mL 氨化乙醇溶液（氨水：乙醇：水=20:70:10），  涡旋 1 min，4000 r/min 离心 5 min，上清液转移至 100 mL 鸡心瓶中,50 ℃ 旋蒸至 2 mL 左右（注意容易暴沸），转移至 15 mL 离心管中，加入水至 10 mL。样品溶液待净化。

2、SPE 柱净化

(1)活化：Polyclean X-PAmide 小柱使用前用 6 mL 甲醇、6 mL 水活化。（使用固相萃取装置，流速 1-2 滴/秒。）

(2)上样和洗脱：在 Polyclean X-PAmide 小柱上加入 10 mL 待净化样品，控制流速在 1-2 滴/秒，弃去流出液。依次用 6 mL 甲醇、6 mL 水淋洗，弃去流出液，抽干。然后用 6 mL 5%

氨化甲醇进行洗脱，控制流速在 1-2 滴/秒，收集洗脱液。

(3)重新溶解：洗脱液于 45 ℃氮吹至干，加 1 mL 水定容，混匀，过 0.45 μm 水系滤膜（注意防止不合适的滤膜吸附一定量的色素而造成损失），待上机测试。

3、HPLC 条件

设     备：Waters Alliance 2690

色谱柱 ：Neptune C18 (4.6×250 mm, 5 μm) 检测器 ：Waters 2487 紫外检测器

流动相：A：甲醇         B：0.02mol/L 乙酸铵缓冲溶液洗脱方式：梯度洗脱

表 1 梯度洗脱条件

时间/min	A%	B%
--	5	95
3	20	80
10.00	60	40
13.00	60	40
15.00	5	95
18.00	5	95

流速：1.0 mL/min 检测波长：254 nm 进样体积：20 μL 六、实验结果

1、0.2 mg/kg 火腿中胭脂红和诱惑红的添加回收结果

表 2   0.2 mg/kg 火腿中胭脂红和诱惑红的添加回收结果