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动物源性食品中四环素类兽药残留量检测
（PolyClean X- HLB）

一、实验目的

本法为以PolyClean X-HLB(60 mg/3mL)小柱开发的针对动物源食品(猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品)中四环素类药物残留检测的样本前处理净化方法，HPLC法作为检测手段。PolyCleanX-HLB(60 mg/3mL)柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好，与知名厂商同型号柱性能相当。

二、实验目标物

土霉素(CAS:79-57-2)、四环素(CAS:60-54-8)、金霉素(CAS:57-62-5)、强力霉素

(CAS:564-25-0)。

三、应用范围

本方法适用于动物源性食品中四环素类药物多残留的HPLC检测及确证。四、参考标准

《GB/T 21317-2007食品安全国家标准动物源性食品中四环素类兽药残留量高效液相色谱法》

五、实验材料

NuAnalyticalPolyCleanX-HLB固相萃取柱60mg/3 mL，W品牌HLB固相萃取柱60 mg/3mL。

六、实验方法

1、样品待测溶液制备

称取混匀牛奶试样5 g(精确到0.01 g)，置于50 mL 离心管中，用0.1 mol/L

EDTA-Mcllvaine缓冲液溶解并定容至50mL，漩涡混合1min，冰水浴超声10min，转移至50mL离心管中，冷却至0℃～4℃，5000r/min离心10min(温度低于15℃)，用快速滤纸过滤待净化。

2、活化

依次用5 mL甲醇和5 mL水活化。

3、上样和洗脱

准确吸取10 mL备用液过HLB固相萃取柱，待样液全部流出后，依次用5 mL水和5

mL甲醇水（1:9，v/v）淋洗，弃去全部流出液。2.0kPa以下减压抽干5 min，最后用10 m

L甲醇-乙酸乙酯(5:95, v/v)洗脱，收集洗脱液。

4、重新溶解

收洗脱液于40℃氮气吹干，加10mmol/L三氟乙酸水溶液1.0mL溶解残余物，滤膜过滤，供HPLC测定。

5、HPLC条件

色谱柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)

检测器：UV@268 nm

流动相：A:乙腈 B:10mmol/L三氟甲酸水溶液

柱温：室温流速：1.0mL/min 进样量：20μL洗脱方式：梯度洗脱，梯度条件如下：

时间/min	A/%	B/%
0.0	4	96
8.0	30	70
18.0	35	65
20.0	4	96
28.0	4	96

七、实验结果

1、0.8mg/kg牛奶基质中四环素的添加回收结果

表1 0.8mg/kg牛奶基质中四环素的添加回收结果

名称	1	回收率（%） 2	3	平均回收率（%）	RSD（%）
土霉素	81.25	80.13	80.15	80.51	1.37
四环素	79.48	80.95	80.50	80.31	1.83
金霉素	95.78	98.1	95.13	96.34	1.62
强力霉素	84.28	89.48	84.38	86.05	3.46

表2 W品牌0.8mg/kg牛奶基质中四环素的添加回收结果

	回收率（%）
名称			平均回收率（%）
	1	2
土霉素	82.53	83.58	83.06
四环素	84.48	85.38	84.93
金霉素	95.45	96.0	95.73
强力霉素	84.85	87.3	86.08

2、添加水平为0.8mg/kg牛奶基质中四环素检测色谱图

图1 添加水平为0.8mg/kg牛奶基质中四环素检测色谱图

动物源性食品中四环素类兽药残留量检测

动物源性食品中四环素类兽药残留量检测 （PolyClean X- HLB）