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蜂蜜中四环素类药物残留检测的固相萃取方法
（PolyClean X-HLB）

一、实验目的

本研究利用固相萃取作为样品前处理方法，HPLC作为分析方法，检测蜂蜜样品中四环素类抗生素的残留水平。该方法操作简便，可简化样品前处理过程，减少有机溶剂的使用。二、实验目标物

土霉素(CAS:79-57-2)、四环素（CAS:60-54-8）。

三、应用范围

本方法适用于蜂蜜中四环素类的固相萃取及HPLC检测与确证。四、参考标准

《GB/T 21317-2007食品安全国家标准 动物源性食品中四环素类药物残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法与高效液相色谱法》

五、实验材料

NuAnalyticalPolyCleanX-HLB固相萃取柱60mg/3mL。六、实验方法

1、 样品待测溶液制备

称取混匀蜂蜜试样5 g(精确到0.01 g)，置于50 mL 离心管中， 用0.1 mol/L

EDTA-Mcllvaine缓冲液溶解并定容至50mL，漩涡混合1min，冰水浴超声10min，转移至50mL离心管中，冷却至0 ℃～4 ℃，5000r/min离心10min（温度低于15 ℃），用中速滤纸过滤待净化。

2、活化

依次用5 mL甲醇和5 mL水活化。

3、上样和洗脱

准确吸取10 mL备用液以1滴/秒的速度过HLB固相萃取柱，待样液全部流出后，依次用5 mL水和5 mL甲醇-水(5:95, v/v)淋洗，弃去全部流出液。2.0 kPa以下减压抽干5 min，最后用10 mL甲醇-乙酸乙酯溶液(1:9, v/v)洗脱，收集洗脱液。

4、重新溶解

洗脱液于40℃氮气吹干，加10 mmol/L三氟乙酸水溶液1.0 mL溶解残余物，滤膜过滤，供HPLC测定。

5、HPLC条件

色谱柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)

检测器：UV@350 nm

流动相：A:   乙腈    B:10mmol/L三氟乙酸水溶液

柱温：室温    流速：1.0mL/min           进样量：20μL