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食品中三聚氰胺检测的固相萃取方法
（PolyClean X- MCX）
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为牛奶样品中三聚氰胺检测的前处理方法，HPLC 法作为检测手段。PolycClean X-MCX (60 mg/3 mL)柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好， 与知名厂商同型号柱性能相当。
二、实验目标物
三聚氰胺 (CAS:108-78-1)
三、应用范围
本方法适用于食品中三聚氰胺的 HPLC 检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》
五、实验材料
NuAnalytical PolyClean X-MCX 固相萃取柱 60 mg/3 mL，W 品牌 HLB 固相萃取柱 60 mg/3 mL 。
六、实验方法
1、 样品待测溶液制备
称取 2.0ｇ试样(精确至 0.001 g)于 50 mL 离心管中，加入 15 mL 1%三氯乙酸溶液和 5 mL乙腈，超声提取 10 min，再振荡提取 10 min，4000 r/min 离心 10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至 25 mL，移取 5 mL 滤液，加入 5 mL 水混匀后做待净化液。
2、活化
依次用 3 mL 甲醇和 5 mL 水活化。
3、上样和洗脱
将待净化液转移至固相萃取柱中。依次用 3 mL 水、3 mL 甲醇洗涤，抽至近干后，用 6mL5%氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过 1 mL/min。
4、重新溶解
洗脱液于 50 ℃下用氮气吹干，残留物用 1 mL 流动相定容，涡旋混合 1 min，过微孔滤膜后，供 HPLC 测定。
5、HPLC 条件
色谱柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)
检测器：UV@240 nm
流动相： 离子对试剂缓冲液(准确称取 2.10 g 柠檬酸和 2.16 g 辛烷磺酸钠，加入约 980
mL 水溶解，调节PH 至 3.0 后，定溶至 1 L 备用)-乙腈(80:20, v/v)
洗脱方式：等度洗脱
柱温：室温
流速：1.0 mL/min
进样量：20μL
七、实验结果
1、2.5mg/kg 牛奶基质中三聚氰胺的添加回收结果
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表 2 W 品牌 MCX 柱 2.5mg/kg 牛奶基质中三聚氰胺的添加回收结果
回收率（%）
名称
平均回收率（%）
1
2
三聚氰胺
71.99
80.24
76.12
2、添加水平为 2.5mg/kg 牛奶基质中三聚氰胺检测色谱图
图 1 添加水平为 2.5mg/kg 牛奶基质中三聚氰胺检测色谱图
