相同的质量控制,可以确保不同批次色谱柱的高重现性,也可以保证您更容易地在UHPLC和HPLC方法之间进行转换,或需要分离和纯化目标化合物时放大到制备应用上。
柱效当然会改变,但可以预料的是,谱带间距(选择性)将相同。
图14阐明了当使用相同的ACE键合相但不同粒径填充的色谱柱进行操作时,可以预见到分析物一致的谱带间距类型(选择性)。
图 14:将ACE固定相从UHPLC(2μm)扩展到HPLC(3μm和5μm)再至制备型HPLC(10μm)时,选择性得到了保留与保证。
条件
流动相:35:65 MeCN/0.1%TFA(溶于水中)
温度:22 ℃
波长:254 nm
分析物
1. 尿嘧啶
2. 4-羟基苯甲酸
3. 乙酰水杨酸
4. 苯甲酸
5. 2-羟基苯甲酸
6. 对羟基苯甲酸乙酯
试验样品的这些色谱图在填充有相同的键合相但不同粒径的色谱柱上以相同的流动相条件运行,结果阐明分离从UHPLC扩展到HPLC再到制备型HPLC的容易程度。
当使用ACE Excel UHPLC色谱柱进行快速方法开发,且该方法必须可转移到HPLC时,易扩展性则显得特别有价值。
图 15:ACE固定相可以提供相同的选择性,无论它们是UHPLC、HPLC还是制备型HPLC色谱柱
条件
色谱柱:2.1 x 50 mm
流动相:1.4分钟内从30% B至90% B
A = 20mM甲酸铵+ 0.1%甲酸
B =乙腈+ 0.1%甲酸
梯度:在30%B时持续0.30分钟,在1.10分钟内从30至90%B,在90%B时持续0.40分钟
流速:0.5 mL/min
柱温:30ºC
检测:AB Sciex Triple Quad(TM)5500 MS,以ESI(+)模式运行
仪器:岛津Prominence UFLC系统
分析物
1. 甲苯咪唑
2. 普罗替林
3. 阿米替林
4. 洛哌丁胺
试验样品的这些色谱图在ACE Excel C18 2μmUHPLC色谱柱、ACE C18 3μmHPLC色谱柱和ACE C185μm色谱柱上以相同的流动相条件运行,结果阐明ACE固定相的选择性一致,无论填充粒径如何。
这使得从UHPLC到HPLC或HPLC再到UHPLC的方法转移更加容易。同时也使得从分析型应用扩展到制备型应用更加容易。