灵敏的检测 - 蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南
利用反相高效液相色谱法分离多肽时，通常通过在214-215 nm波长附近的紫外吸收检测。
肽键在这一波长范围内吸收较好，为各类型多肽提供最灵敏的检测。
采用短波紫外波段检测的一个问题是流动相的吸收。
在波长215 nm处，乙腈不吸收紫外光，但TFA会略有吸收。
在梯度洗脱期间，增加有机溶剂的浓度会使溶液的介电常数发生改变，这将引起TFA在短波紫外波段吸收光谱的变化。
这一吸光度变化会导致基线上飘，如图21所示。在需要灵敏检测时尤其明显。
在示例中，多肽图谱经常显示出基线飘高（图22）。避免基线漂移的常见做法是降低有机溶剂中TFA的浓度（相对于水溶性溶剂）。
如果在水溶性溶剂中加入0.1%的TFA，则在有机溶剂中加入0.08-0.09%的TFA。这将使多肽图谱中的基线趋平。
图21. 梯度洗脱期间，增加乙腈的浓度会改变流动相的介电常数，从而由于TFA吸收光谱的变化导致基线飘高。
图22. 随着有机溶剂浓度的增加，TFA吸收率变化可能引起多肽图谱中基线的漂移。
