作为生命活动的主要承担者,蛋白质一直是人们研究的热点。依据其物理、化学及生物学特征,已有多种分离手段,如沉淀法、超滤法、电泳法、层析法等。其中,液相色谱技术由于重复性好、分辨率高等优势在蛋白质分离中得到广泛应用,下面介绍四种分离模式及对应色谱柱。
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一、反相(RPC)
反相HPLC灵敏、通用性强,能够分离结构近乎相同的蛋白质。ACE反相色谱柱采用含极低金属离子杂质的超惰性硅胶制成,使用极低浓度离子对试剂依然可以维持良好的峰形。
二、体积排阻(GFC/SEC)
体积排阻色谱,也被称为凝胶色谱,是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。Galaxy系列体积排阻色谱柱基于独有的表面修饰技术,在高纯度硅胶基质上键合一层均匀、亲水、纳米厚度的中性聚合物薄膜,适合分离蛋白药物(人血白蛋白、免疫球蛋白、HGH、EPO 等)。
三、离子交换(IEC)
离子交换色谱,是根据蛋白质分子在一定PH值和离子强度条件下所带电荷的差异进行分离的方法。Madex 系列离子交换色谱柱以聚苯乙烯/二乙烯苯(PS/DVB)颗粒为填料,并在其表面键合有一层高度亲水的纳米厚度的中性聚合物薄膜,最后再将离子交换官能团致密、均匀地键合在亲水表面而制成。四种固定相互补,其中,WCX 固定相是专为抗体分离而设计。
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四、疏水作用(HIC)
疏水作用色谱,在保持蛋白活性前提下,是根据分子表面疏水性差异分离蛋白质的方法。Madex HIC-B 疏水作用色谱柱是以聚苯乙烯/二乙烯基苯(PS/DVB)为基质,通过独有的化学键合技术将丁基均匀、致密地键合在基质表面而制成。这种无孔单分散的疏水填料特别适合于分离单克隆抗体、抗体偶联物(ADC)及具有疏水性差异的蛋白片段等。
总结
色谱技术已发展成一种强大的分离技术,能够分离大量蛋白质,但是任何一种单独的色谱技术无法完全满足实验和生产的需要。因此,多种色谱技术的结合使用已成为蛋白质分离的一种普遍方法。